MC-Easy™ Minicircle DNA 生产试剂盒（含感受态细胞）|系统生物科学

来自 : 发布时间：2024-12-26

MC-Easy™ Minicircle DNA 生产试剂盒（含感受态细胞） 使用该试剂盒可轻松生产 minicircle，提供一种高效的方式来生产高质量的 minicircle DNA（包括感受态 ZYCY10P3S2T 细胞）。游离型表达持续数周无外来 DNA 更高效的小细胞转染质粒大小无限插入大小优化大肠杆菌小环生产菌株想咨询专家？联系我们或 1-888-266-5066跳到图片库的末尾 跳到图片库的开头产品目录编号DescriptionSizePriceQuantity添加到购物车MN920A-1MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒（包括 ZYCY10P3S2T 生产大肠杆菌菌株）5 Preps$1034联系我们MN925A-1MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒（包括 ZYCY10P3S2T producer E. coli 菌株）10 Preps$1846联系我们概述这个简单高效的试剂盒

MC-Easy™ Minicircle DNA 生产试剂盒可以简单、可重复且高效地生产高质量的 Minicircle DNA。微调的生长和诱导培养基针对小环生产进行了优化，随附的 ATP 依赖性 DNase 试剂可选择性地去除基因组 DNA 而不会影响小环 DNA 的质量，从而实现清洁有效的小环生产制备。

从 ZYCY10P3S2T E.coli Minicircle Production Competent Cells (Cat.# MN920A-1/MN925A-1) 附带的试剂盒中选择，或者选择不包含感受态细胞的试剂盒 (Cat.# MN910A-1/MN915A- 1).营利性组织，请参阅本节末尾的产品说明。

我们的 MC-Easy 试剂盒还附带一种特殊的小环 DNA 转染试剂 MC-Fection™，适用于大多数细胞线。

关于 Minicircle 技术游离型表达持续数周无外源 DNA 小质粒转染效率更高d 大小 无限插入大小 优化的大肠杆菌微环生产菌株 在体外和体内均有效

如果您希望在不引入任何外源 DNA 的情况下持续表达转基因——例如用于模型动物和基因治疗开发——微环技术是一个很好的基因表达选择。非病毒游离型 Minicircle 表达盒是从亲本质粒中提取的小型环状 DNA 片段，不含任何细菌质粒 DNA 序列，并带有多种启动子和报告基因组合。与标准大小的质粒相比，它们的小尺寸有助于更有效的转染，而且，虽然小环不会与宿主细胞一起复制，但在分裂细胞中表达持续 14 天或更长时间，并且可以在非分裂细胞中持续数月。

产品说明：

亲本小环质粒和 ZYCY10P3S2T 生产菌菌株仅供非营利研究人员购买。商业用户可以购买仅预制、随时可转染的小环 DNA。 SBI 还为非营利和商业最终用户提供定制亲本质粒克隆和小环 DNA 生产——请联系 services@systembio.com 了解更多详情。对于任何其他目的，包括购买亲本 MC 生产系统的能力，商业用户应通过 tech@systembio.com 联系 SBI 以获取更多信息。

MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒组件MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒组件Minicircle DNA 再纯化试剂盒（无内毒素水、Minicircle 安全 DNase、ATP (25mM)、10X DNase 缓冲液、沉淀缓冲液）5x Minicircle Growth Medium5x Induction MediumMC-Fection transfection reagent for minicircle DNAMinicircle DNA spin columnsCompetent cells, minicircle E. coli生产菌株 ZYCY10P3S2T（仅限目录号 MN920A-1 和 MN925A-1，购买限制见产品说明） 工作原理工作原理快速简便的 MC-Easy 微型环制备方案

Goin使用 MC-Easy 试剂盒，从亲本微环质粒 ready-for-maxi-prep 颗粒中提取 g 是一个简单的 2 天过程：

第 1 天，用 ZYCY10P3S2T 微环生产细胞接种 2 mL LB/Kan用亲本小环质粒转化，30℃培养1小时。使用 2 mL 培养物接种 200 mL LB/Kan，并在 30°C 下振荡 16 小时（或过夜）。 第 2 天 添加 200 mL 诱导培养基（包含在 MC-Easy 试剂盒中），并在 30°C 下振荡 5.5 小时30°C。将培养物转移到离心瓶中并以 1,500g 离心 15 分钟。倒出培养基并继续使用小环 maxiprep 或冷冻沉淀。从亲代克隆载体生成小环

要生成准备转染的小环，您需要带有插入片段（基因、启动子基因）的小环克隆载体盒、小 RNA 等）、SBI 优化的、随时可转化的 ZYCY10P3S2T E. coli Minicircle Producer Strain（Cat.# MN900A-1）和阿拉伯糖（Cat.# MN850A-1）。

小环是使用 PhiC31 整合酶从全尺寸亲本小环产生的，PhiC31 整合酶介导亲本质粒上 PhiC321 attB 和 attP 位点之间的重组事件（图 1）。该反应产生两种产物——小环，现在不含任何细菌 DNA 序列——和亲本质粒。为了去除亲本质粒，I-SceI核酸内切酶识别并作用于亲本质粒上的I-SceI位点，导致亲本质粒降解。

图 1 . 从亲代小环质粒中生成小环 DNA。

有关 ZYCY10P3S2T 大肠杆菌小环生产者菌株的更多信息

小环生产者菌株具有阿拉伯糖诱导系统，可表达 PhiC31 整合酶和 I-SceI 核酸内切酶同时地。 ZYCY10P3S2T 菌株还包含一个强大的阿拉伯糖转运蛋白 LacY A177C 基因。向培养基中添加阿拉伯糖会开启 PhiC31 整合酶和核酸内切酶基因的表达，导致亲本小环质粒分离成单个小环和亲本质粒（来自 PhiC31 整合酶活性），以及亲本质粒的降解（来自 I- SceI 核酸内切酶活性）。

Supporting DataSupporting DataEasy and clean minicircle production

图 1. 使用 MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒轻松干净地生产迷你环。请注意仅出现在未使用 MC-Easy 试剂盒的小环制备物中的基因组和亲本 DNA 条带。

在转染后实现小环的持续表达

图 2. 在大多数细胞类型中轻松、持续地转染。将 1 μg 小环 DNA（pMC.CMV-MCS-EF1-GFPSV40PolyA，Cat.# MN511A-1）转染到 HEK293 细胞中可提供超过一周的稳健基因表达。

图 3. 在动物模型中表达转基因数周。 (A) 将 2 µg 和 4 µg 微环 DNA (CMV-GFP-Luc) 流体动力学尾静脉注射到小鼠体内，48 小时后表现出色。 (B) 与转基因相比，小环递送的转基因保留了可以持续数周的稳健表达使用质粒 DNA 传递，表达迅速丢失。在这项研究中，通过流体动力尾静脉注射将 40 µg 微环 DNA 引入小鼠体内。

FAQsResources 手册：基因递送和表达产品和服务 用户手册：Minicircle DNA 载体技术 协议：MC-Easy Minicircle Production 产品表：MC-Easy Minicircle制作套件 产品表：Minicircle技术相关产品相关产品 卡那霉素溶液立即购买 阿拉伯糖诱导溶液立即购买 ZYCY10P3S2T 小环生产菌株（感受态细胞）立即购买 MC-Easy™ 小环 DNA 生产试剂盒 (不含感受态细胞）立即购买 MC-Easy™ 额外媒体包立即购买引文约翰斯顿、CD 等。 (2019) 系统地规避细菌中的限制性修饰屏障。过程。国家队。学院。科学。美国..2019;. PM ID：31097593Han, D, et al. (2019) 激活褪黑激素受体 2 但不激活褪黑激素受体 1 介导褪黑激素赋予的心脏保护作用，防止心肌缺血/再灌注损伤。 J. 松果体研究..2019;:e12571。 PM ID:30903623Petrini, S, et al. (2017) 老年诱导多能干细胞 (iPSCs) 作为研究过早衰老的新细胞模型。老龄化（纽约州奥尔巴尼）。2017 年； 9(5):1453-1469。 PM ID:28562315Kelton, W, et al. (2017) 通过 CRISPR-Cas9 辅助盒交换重新编程 MHC 特异性。科学报告.2017； 7:45775。 PM ID:28374766Traub, S, et al. (2017) 原肌球蛋白受体激酶 B 激动抗体对人诱导多能干 (hiPS) 细胞衍生神经元的药物特性。 J.药理学。 Exp。热..2017; 361(3):355-365。私信编号：28351853Liu, N, 等。 (2017) PIM1-小环作为心肌梗塞的治疗方法。 PLoS ONE.2017； 12（3）：e0173963。 PM ID：28323876Zhang, Z, et al. (2017) TIPE2 的基因传递通过 CD8(+) T 和 NK 细胞介导的抗肿瘤反应抑制乳腺癌的发展和转移。分子。免疫学..2017; 85:230-237。 PM ID:28314212Henno, L, et al. (2017) 使用二维和三维琼脂糖凝胶电泳分析人乳头瘤病毒基因组复制。 Curr Protoc Microbiol.2017； 45:14B.10.1-14B.10.37。 PM ID：28510360Jaafar, L, et al. (2017) SFPQ•NONO 和 XLF 分别和共同发挥作用，通过规范的非同源末端连接促进 DNA 双链断裂修复。核酸研究..2017; 45(4):1848-1859。 PM ID:27924002Wu, H, et al. (2017) MicroRNA-206 通过促进胰岛素信号传导和损害脂肪生成来预防肝脂肪变性和高血糖症。 J. Hepatol..2017; 66(4):816-824。 PM ID:28025059Tidd, N, et al. (2017) Minicircle 介导的基因递送至犬和​​马的间充质干细胞。 Int J Mol Sci.2017； 18（4）。 PM ID：28417917Brett, E, et al. (2017) 基于磁性纳米粒子的 B 细胞淋巴瘤 2 上调增强骨再生。干细胞 Transl Med.2017； 6(1):151-160。 PM ID：28170185Tockner, B, et al. (2016) 适用于修复大量 COL7A1 突变的 RNA 反式剪接分子的构建和验证。基因疗法..2016; 23(11)：775-784。 PM ID:27434145Sun, JG, et al. (2016) Yap1 通过抑制 Smad3 信号促进乳腺肿瘤起始细胞的存活和自我更新。 Oncotarget.2016； 7(9):9692-706。 PM ID：26695440Sharma，VS。 (2016) 大小控制人诱导多能干细胞在摇动微孔中的视网膜分化。论文.2016;.链接：ThesisDincer, E, et al. (2016) 土耳其托斯卡纳病毒的犬类感染和部分 S 片段序列分析。媒介传播的人畜共患疾病..2016; 16(9):611-8。 PM ID:27400226Gaspar, VM, et al. (2016) minici 的高选择性捕获一种新型锌-组氨酸肽偶联物的 rcle DNA 生物药物。分离纯化技术.2016; 174:417–424。链接：Separation and Purification TechnologyMofid, A. (2016) 超声介导的 S100A6 基因疗法改善心肌缺血/再灌注 (I/R) 损伤。论文.2016;.链接：ThesisFernandes, AR & Chari, DM。 (2016) 第二部分：使用小环 DNA 和纳米粒子将神经治疗基因功能性递送至神经干细胞：再生神经学的转化优势。 J Control Release.2016; 238:300-10。 PM ID：27369863Fernandes, AR & Chari, DM。 (2016) 第一部分：Minicircle 载体技术使用纳米颗粒载体限制 DNA 大小对离体基因递送的限制：克服神经干细胞治疗中的翻译障碍。 J Control Release.2016; 238:289-99。 PM ID：27317366查看更多MC-Easy™ Minicircle DNA 生产试剂盒（含感受态细胞）1,034.00 美元产品概述工作原理支持数据常见问题解答资源相关产品引文产品ucts 目录编号描述尺寸价格数量添加到购物车MN920A-1MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒（包括 ZYCY10P3S2T 生产大肠杆菌菌株）5 Preps$1034联系我们MN925A-1MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒（包括 ZYCY10P3S2T 生产大肠杆菌菌株）10 Preps$1 846联系我们概述概述简化使用这种简单高效的试剂盒生产小环

MC-Easy™ 小环 DNA 生产试剂盒可以简单、可重复且高效地生产高质量的小环 DNA。微调的生长和诱导培养基针对小环生产进行了优化，随附的 ATP 依赖性 DNase 试剂可选择性地去除基因组 DNA 而不会影响小环 DNA 的质量，从而实现清洁有效的小环生产制备。

从 ZYCY10P3S2T E.coli Minicircle Production Competent Cells (Cat.# MN920A-1/MN925A-1) 附带的试剂盒中选择，或者选择不包含感受态细胞的试剂盒 (Cat.# MN910A-1/MN915A- 1).营利性组织anizations，请参阅本节末尾的产品说明。

我们的 MC-Easy 试剂盒还附带一种特殊的小环 DNA 转染试剂 MC-Fection™，适用于大多数细胞系。关于 Minicircle 技术 游离型表达持续数周 不含外源 DNA 从小质粒更高效转染 无限插入大小 优化的大肠杆菌 minicircle 生产菌株 在体外和体内均有效

当您想要在不引入任何外来 DNA 的情况下持续转基因表达时—例如对于模型动物和基因治疗的开发—Minicircle 技术是一个很好的基因表达选择。非病毒游离型 Minicircle 表达盒是从亲本质粒中提取的小型环状 DNA 片段，不含任何细菌质粒 DNA 序列，并带有多种启动子和报告基因组合。与标准大小的质粒相比，它们的小尺寸有助于更有效的转染，而且，虽然 Minicircles 不随宿主细胞复制，在分裂细胞中表达持续 14 天或更长时间，在非分裂细胞中可以持续数月。

产品说明：

亲本小环质粒和 ZYCY10P3S2T 生产菌菌株仅供非营利研究人员购买。商业用户只能购买预制的、即用型微环 DNA。 SBI 还为非营利和商业最终用户提供定制亲本质粒克隆和小环 DNA 生产——请联系 services@systembio.com 了解更多详情。对于任何其他目的，包括购买亲本 MC 生产系统的能力，商业用户应通过 tech@systembio.com 联系 SBI 以获取更多信息。

MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒组件MC-Easy Minicircle DNA 生产试剂盒组件Minicircle DNA 再纯化试剂盒（无内毒素水、Minicircle 安全 DNase、ATP (25mM)、10X DNase 缓冲液、沉淀缓冲液）5x Minicircle Growth Medium5x Induction MediumMC-Fection transfection reagent for minicircle DNAMinicircle DNA spin columnsCompetent cells, minicircle E. coli producer strain ZYCY10P3S2T (Cat. # MN920A-1 and MN925A-1 only, see Product Note for purchasing restrictions) How It WorksHow It WorksThe 快速和easy MC-Easy 微环制备方案

使用 MC-Easy 试剂盒从亲代微环质粒准备好进行最大制备沉淀是一个简单的 2 天过程：

第 1 天接种 2 mL LB/ Kan 与 ZYCY10P3S2T Minicircle Production Cells 已经用亲本 minicircle 质粒转化，并在 30°C 下生长 1 小时。使用 2 mL 培养物接种 200 mL LB/Kan，并在 30°C 下振荡 16 小时（或过夜）。 第 2 天 添加 200 mL 诱导培养基（包含在 MC-Easy 试剂盒中），并在 30°C 下振荡 5.5 小时30°C。将培养物转移到离心瓶中并以 1,500g 离心 15 分钟。倒出培养基并继续使用 minicircle maxiprep 或冷冻沉淀。生成 minicir来自亲代克隆载体的 cles

要生成准备好转染的小环，您需要带有插入片段（基因、启动子基因盒、小 RNA 等）、SBI 优化的、随时可转化的小环克隆载体ZYCY10P3S2T E. coli Minicircle Producer Strain (Cat.# MN900A-1), and arabinose (Cat.# MN850A-1)。

小环是使用 PhiC31 整合酶从全尺寸亲本小环产生的，它介导亲代质粒上 PhiC321 attB 和 attP 位点之间的重组事件（图 1）。该反应产生两种产物——小环，现在不含任何细菌 DNA 序列——和亲本质粒。为了去除亲本质粒，I-SceI核酸内切酶识别并作用于亲本质粒上的I-SceI位点，导致亲本质粒降解。

图 1. 从亲本小环质粒生成小环 DNA。

更多关于 ZYCY10P3S2T 大肠杆菌小环生产者菌株

Minicircle Producer Strain 具有阿拉伯糖诱导系统，可同时表达 PhiC31 整合酶和 I-SceI 核酸内切酶。ZYCY10P3S2T 菌株还含有强大的阿拉伯糖转运蛋白 LacY A177C 基因。向培养基中添加阿拉伯糖可开启 PhiC31 整合酶和核酸内切酶基因的表达, 导致亲本小环质粒分离成单个小环和亲本质粒（来自 PhiC31 整合酶活性），以及亲本质粒的降解（来自 I-SceI 核酸内切酶活性）。

支持数据支持数据简单干净的小环production

图 1. 使用 MC-Easy Minicircle DNA Production Kit 轻松干净地制作迷你环。请注意基因组和亲本 DNA 条带仅出现在未使用 MC-Easy 试剂盒的小环制备。

在体外和体内转染后实现小环的持续表达

图 2. 简单, 在大多数细胞类型中持续转染。将 1 μg 小环 DNA（pMC.CMV-MCS-EF1-GFPSV40PolyA，Cat.# MN511A-1）转染到 HEK293 细胞中可提供超过一周的稳健基因表达。

图 3. 在动物模型中表达转基因数周。(A) 流体动力尾静脉注射 2 µg 和 4 µg 微环 DNA (CMV-GFP-Luc)进入小鼠体内 48 小时后表现出优异的表达。(B) 与使用质粒 DNA 递送的转基因相比，表达迅速丢失的转基因与小环递送的转基因保持稳定的表达可以持续数周。在这项研究中，40 µg 小环 DNA通过流体动力尾静脉注射引入小鼠体内。

FAQsResources 手册：基因传递和表达产品和服务用户手册：Minicircle DNA载体技术协议：MC-Easy Minicircle Production 产品表：MC- Easy Minicircle 制作工具包 产品表：Minicircle 技术相关产品相关产品卡那霉素溶液立即购买阿拉伯糖诱导解决方案立即购买 ZYCY10P3S2T Minicircle Production Strain (Competent Cells)立即购买 MC-Easy™ Minicircle DNA 生产试剂盒（不含感受态细胞）立即购买 MC-Easy™ Bonus Media Pack立即购买CitationsJohnston, CD, et al. (2019) Systematic evasion of the restriction-细菌修饰屏障。Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A..2019;. PM ID:31097593Han, D, et al. (2019) Activation of Melatonin Receptor 2 But Not Melatonin Receptor 1 Mediates Melatonin-conferred Cardio-protection Against Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury. J. Pineal Res..2019;:e12571. PM ID:30903623Petrini, S, et al. (2017) Aged induced pluripotent stem cell (iPSCs) as a new cellular model for studying premature aging. Aging (Albany) NY).2017; 9(5):1453-1469.PM ID:28562315Kelton, W, et al. (2017) Rep通过 CRISPR-Cas9 辅助盒式交换对 MHC 特异性进行编码。科学报告.2017； 7:45775。 PM ID:28374766Traub, S, et al. (2017) 原肌球蛋白受体激酶 B 激动抗体对人诱导多能干 (hiPS) 细胞衍生神经元的药物特性。 J.药理学。 Exp。热..2017; 361(3):355-365。 PM ID:28351853Liu, N, et al. (2017) PIM1-小环作为心肌梗塞的治疗方法。 PLoS ONE.2017； 12（3）：e0173963。 PM ID：28323876Zhang, Z, et al. (2017) TIPE2 的基因传递通过 CD8(+) T 和 NK 细胞介导的抗肿瘤反应抑制乳腺癌的发展和转移。分子。免疫学..2017; 85:230-237。 PM ID:28314212Henno, L, et al. (2017) 使用二维和三维琼脂糖凝胶电泳分析人乳头瘤病毒基因组复制。 Curr Protoc Microbiol.2017； 45:14B.10.1-14B.10.37。 PM ID：28510360Jaafar, L, et al. (2017) SFPQ•NONO和XLF分别和共同作用促进DNA双链断裂修复vi规范的非同源末端连接。核酸研究..2017; 45(4):1848-1859。 PM ID:27924002Wu, H, et al. (2017) MicroRNA-206 通过促进胰岛素信号传导和损害脂肪生成来预防肝脂肪变性和高血糖症。 J. Hepatol..2017; 66(4):816-824。 PM ID:28025059Tidd, N, et al. (2017) Minicircle 介导的基因递送至犬和马间充质干细胞。 Int J Mol Sci.2017； 18（4）。 PM ID：28417917Brett, E, et al. (2017) 基于磁性纳米粒子的 B 细胞淋巴瘤 2 上调增强骨再生。干细胞 Transl Med.2017； 6(1):151-160。 PM ID：28170185Tockner, B, et al. (2016) 适用于修复大量 COL7A1 突变的 RNA 反式剪接分子的构建和验证。基因疗法..2016; 23(11)：775-784。 PM ID:27434145Sun, JG, et al. (2016) Yap1 通过抑制 Smad3 信号促进乳腺肿瘤起始细胞的存活和自我更新。 Oncotarget.2016； 7(9):9692-706。 PM ID：26695440Sharma，VS。 (2016) 尺寸控制网人诱导多能干细胞在摇动微孔中的最终分化。论文.2016;.链接：ThesisDincer, E, et al. (2016) 土耳其托斯卡纳病毒的犬类感染和部分 S 片段序列分析。媒介传播的人畜共患疾病..2016; 16(9):611-8。 PM ID:27400226Gaspar, VM, et al. (2016) 新型锌-组氨酸肽偶联物对小环 DNA 生物药物的高选择性捕获。分离纯化技术.2016; 174:417–424。链接：Separation and Purification TechnologyMofid, A. (2016) 超声介导的 S100A6 基因疗法改善心肌缺血/再灌注 (I/R) 损伤。论文.2016;.链接：ThesisFernandes, AR & Chari, DM。 (2016) 第二部分：使用小环 DNA 和纳米粒子将神经治疗基因功能性递送至神经干细胞：再生神经学的转化优势。 J Control Release.2016; 238:300-10。 PM ID：27369863Fernandes, AR & Chari, DM。 (2016) 第一部分：小环载体技术限制 DNA 大小限制使用纳米粒子载体对离体基因传递的作用：克服神经干细胞治疗中的翻译障碍。 J Control Release.2016; 238:289-99。 PM ID:27317366查看更多