用于平台细胞系生成和重定向的 PinPoint-HR 系统 |系统生物科学

来自 : 发布时间：2024-12-26

用于平台细胞系生成和重定向的 PinPoint-HR 系统使用 CRISPR/Cas9 系统获取 PinPoint 靶向整合所需的所有 PinPoint 质粒，将 PinPoint attP 位点放入目标基因组PinPoint-HR attP 放置载体 (# PIN400A-1) PinPoint 整合酶表达质粒 (#PIN200A-1)CAG PinPoint 供体载体 (#PIN510A-1)CAG-GFP-T2A-Luc PinPoint 阳性对照供体载体 (#PIN600A-1)想咨询专家？联系我们或 1-888-266-5066跳到图片库的末尾 跳至图片库开头产品目录编号DescriptionSizePriceQuantity添加到购物车PIN400A-KITPinPoint-HR 平台细胞系生成和重定向系统（包括 PIN400A-1、PIN200A-1、PIN510A-1、 & PIN600A-1)1 Kit$2687Contact UsOverview 概述

高效等基因细胞系属PinPoint-HR System for Platform Cell Line Generation and Retargeting 使细胞系生成和重定向可靠、高效且适合高通量生产，用于平台细胞系生成和重定向的 PinPoint-HR 系统提供了实施细胞系所需的所有 PinPoint 质粒PinPoint 系统使用 CRISPR/Cas9 将 PinPoint attP 位点置于目标基因组中。

PinPoint-HR 系统包括：

PinPoint-HR attP 放置载体 (# PIN400A-1) The PinPoint整合酶表达质粒 (# PIN200A-1) CAG PinPoint 供体载体 (# PIN510A-1) CAG-GFP-T2A-Luc PinPoint 阳性对照供体载体 (# PIN600A-1)工作原理工作原理

靶向整合PinPoint 系统

使用 PinPoint 靶向整合系统改造细胞是一个两步过程：

使用 PhiC31 整合酶将 PinPoint 放置位点 (PinPoint attP) 插入目标基因组，优先插入基因组的转录活性位点，或CRISPR/Cas9 系统用于插入到定义的基因座，例如 AAVS1 安全港站点。将 PinPoint 向量集成到预先放置的 attP 站点。整合由 PinPoint Integrase 介导，它介导 PinPoint attB 站点（位于 PinPoint Vector 上）和 PinPoint attP 站点（在步骤 1 中放入目标基因组中）之间的重组事件。因为 PinPoint Integrase 只识别您预先放置的 PinPoint attP 位点，所以您可以非常严格地控制整合位置。

第三个可选步骤涉及使用 Cre/Lox 系统去除额外的载体序列，只留下您的表达盒和单个 LoxP 站点。

将 PinPoint attP 与 CRISPR/Cas9 系统放置

当您使用PinPoint-HR 在tP Placement Vector 用于插入 PinPoint attP 位点，Placement Vector 上的 PGK 启动子与任何 SBI 的 PinPoint Donor Vectors 上的无启动子嘌呤霉素标记相结合，只有当 PinPoint Donor Vector 整合到正确的位点时才能选择嘌呤霉素。

支持数据支持数据

查看运行中的 PinPoint 靶向集成系统

图 1. 使用 PhiC31 系统有效放置 PinPoint attP 站点。 PinPoint Targeted Integration System的第1步——放置PinPoint attP站点使用 PinPoint-FC 放置载体（Cat.# PIN300A-1）和 PhiC31 整合酶（Cat.# FC200PA-1）进入 HEK293 细胞。用 G418（新霉素抗性）选择阳性细胞 14 天，挑取并扩增 6 个独立的细胞系。十一天后，将细胞固定并用 50% 甲醇加 1% 亚甲蓝的溶液染色。板用 PBS 洗涤两次并风干。只有用 PhiC31 整合酶表达质粒转染的细胞板显示出大量细胞。

图 2. 与 PinPoint 整合酶和 PinPoint 供体质粒的靶向整合。 PinPoint 靶向整合系统的第 2 步——图 1 中创建的细胞系用阳性 Co 转染ntrol PinPoint 基因供体载体表达 GFP (Cat.# PIN600A-1) 用于精确整合。与类似系统中使用的 R4 整合酶不同，PinPoint 整合酶不识别伪位点，只会在其放置的识别序列处进行整合。与 R4 整合酶系统相比，此功能可提高正确重定向细胞系的效率。整个治疗基因表达盒是活跃的，并与 cHS4 DNA 元件完全绝缘。

图 3. PinPoint 整合酶介导了 PinPoint 供体载体的特定放置。我们使用连接 PCR 分析来验证 PinPoint 供体载体是否已整合到针对正确位点的正确位点，从而在 PinPoint attL 中进行扩增位点（在 PinPoint 介导的整合后，质粒携带的 PinPoint attP 和 attB 位点成为基因组 attL 和 attR 位点）。 L1、L2 和 L3 泳道中条带的出现仅表示预测的 PinPoint 整合酶介导的 PIN600A-1 供体载体以高精度插入 PinPoint attP 位点。

FAQsResources 手册：基因递送和表达产品和服务 用户手册：PinPoint靶向整合系统 产品说明书：PinPoint靶向整合系统相关产品相关产品用于平台细胞系生成和重定向的 PinPoint-FC 系统立即购买用于平台细胞系生成和重定向 AAVS1 的 PinPoint-HR 系统重新定位立即选购引用 PinPoint-HR System for Platform 细胞系生成和重定向 2,687.00 美元产品概述如何工作支持数据常见问题解答资源相关产品引文产品目录编号描述尺寸价格数量添加到购物车PIN400A-KITPPinPoint-HR 平台细胞系生成和重定向系统（包括 PIN400A-1、PIN200A-1、PIN510A-1 和 PIN600A-1）1套件$2687联系我们概述

高效的同基因细胞系生成和重定向

使细胞系生成和重定向可靠、高效且适合高通量生产，PinPoint-HR System for Platform Cell Line Generation and重定向提供了使用 CRISPR/Cas9 实施 PinPoint 系统所需的所有 PinPoint 质粒，以将 PinPoint attP 位点置于目标基因组中。

PinPoint-HR 系统包括：

PinPoint-HR attP 放置载体 (#PIN400A-1) PinPoint 整合酶表达质粒 (#PIN200A-1) CAG PinPoint 供体载体 (#PIN510A-1) CAG-GFP-T2A-Luc PinPoint Pos主动控制供体载体 (# PIN600A-1)工作原理如何工作

使用 PinPoint 系统进行靶向整合

使用 PinPoint 靶向整合系统改造细胞是一个两步过程：

使用 PhiC31 整合酶将 PinPoint 放置位点 (PinPoint attP) 插入目标基因组，优先插入基因组的转录活性位点，或使用 CRISPR/Cas9 系统插入定义的位点，例如 AAVS1 Safe Harbor站点。将 PinPoint Vector 集成到预先放置的 attP 站点中。整合由 PinPoint Integrase 介导，它介导 PinPoint attB 站点（位于 PinPoint Vector 上）和 PinPoint attP 站点（在步骤 1 中放入目标基因组中）之间的重组事件。因为 PinPoint Integrase 只识别您预先放置的 PinPoint attP 位点，所以您可以非常严格地控制整合位置。

第三个可选步骤涉及使用 t 去除额外的向量序列他的 Cre/Lox 系统，只留下你的表达盒和一个 LoxP 位点。

将 PinPoint attP 与 CRISPR 放在一起/Cas9 系统

当您使用 PinPoint-HR attP Placement Vector 插入 PinPoint attP 位点时，Placement Vector 上的 PGK 启动子与任何 SBI 的 PinPoint Donor Vector 上的无启动子嘌呤霉素标记结合，以启用仅当 PinPoint 供体载体整合到正确位点时才选择嘌呤霉素。

支持数据支持数据

请参阅 PinPoint 靶向整合系统ction

图 1. 使用 PhiC31 系统高效放置 PinPoint attP 站点。 PinPoint 靶向整合系统的第 1 步——使用 PinPoint-FC Placement Vector (Cat.# PIN300A-1) 和 PhiC31 Integrase (Cat.# FC200PA-1) 将 PinPoint attP 位点置于 HEK293 细胞中。用 G418（新霉素抗性）选择阳性细胞 14 天，挑取并扩增 6 个独立的细胞系。十一天后，将细胞固定并用 50% 甲醇加 1% 亚甲蓝的溶液染色。板用 PBS 洗涤两次并风干。只有用 PhiC31 整合酶表达质粒转染的细胞板显示出大量细胞。

p class=\"caption--image well\">图 2. PinPoint 整合酶和 PinPoint 供体质粒的靶向整合。PinPoint 靶向整合系统的第 2 步——图 1 中创建的细胞系转染了阳性对照 PinPoint 基因Donor Vector expressing GFP (Cat.# PIN600A-1) for precise integration. 与类似系统中使用的 R4 整合酶不同，PinPoint Integrase 不识别伪位点，只会在其放置的识别序列处整合。此功能导致与 R4 整合酶系统相比，提高了正确重定向细胞系的效率。整个治疗基因表达盒是活跃的，并且与 cHS4 DNA 元件完全绝缘。

图 3. PinPoint Integrase 介导的PinPoint 供体载体的特定位置。我们使用连接 PCR 测定来验证 PinPoint 供体载体是否整合到针对正确位点的正确位点，并在 PinPoint attL 位点上进行扩增（在 PinPoint 介导的整合后，质粒携带的 PinPoint attP 和 attB 位点成为基因组 attL 和 attR 位点）。L1、L2 和 L3 泳道中条带的出现仅表明预测的 PinPoint 整合酶介导的 PIN600A-1 供体载体在放置的 PinPoint attP 位点具有高

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